環氧乙烷不損害滅菌的物品且穿透力很強，故多數不宜用一般方法滅菌的物品均可用環氧乙烷消毒和滅菌。例如，電子儀器、光學儀器、器械、書籍、文件、皮毛、棉、化纖、塑料制品、木制品、陶瓷及金屬制品、內鏡和一次性使用的診療用品等。環氧乙烷是目前最主要的低溫滅菌方法之一。
操作程序
(1) 根據試驗要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內密封包裝，每袋2片。每次試驗用20袋。
(2) 將滅菌器上、中、下3層，每層內、中、外各設一點，共設9點。每點物品中間布放1袋，共需18袋試驗菌片。另將一袋（2片）菌片放置在室溫條件下作為陽性對照。
(3) 按使用說明書所規定的環氧乙烷濃度、作用時間、柜內的溫度和相對濕度，在滿載條件下進行環氧乙烷滅菌處理。滿載用物品，隨滅菌器用途而定。處理完畢，取出菌片，分別移種于5 ml 營養肉湯培養基中，置37℃ 培養箱內培養，7d后觀察最終結果(定性培養檢測)。
對難以判斷結果的營養肉湯管，取其中0.2ml懸液接種營養瓊脂平板，用無菌L棒涂抹均勻，置37℃ 培養箱內培養。48h后涂片染色，顯微鏡下觀察菌落形態，或進一步做其他試驗，判斷有無生長或生長的是否為試驗菌。若為非試驗菌，則應重新進行試驗。
(4) 測試中，應同時設立定性和定量陽性對照組與陰性對照組。
(5) 定量陽性對照組，以同批試驗用菌片置室溫下，待消毒或滅菌試驗組達規定作用時間后，立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法進行活菌培養計數。
(6) 定性陽性對照組，以同批試驗用菌片置室溫下，待滅菌試驗組達規定作用時間后，立即將該菌片2 片，分別接種于5.0ml 營養肉湯培養基，放入溫箱中作定性培養，觀察有細菌生長情況。
(7) 陰性對照組，以同批次試驗用未染菌樣片2 片，分別接種于5.0ml 營養肉湯培養基，同時將未接種過的營養肉湯培養基放入培養箱中作定性培養，觀察有無細菌生長。
(8) 試驗重復5 次。
(9)在5次試驗中，每次試驗中的陽性對照菌片，回收菌量均應在5×10cfu/片～5×10cfu/片；定性陽性對照組，細菌生長良好；陰性對照應無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結果，試驗作廢，重新進行。
評價規定
在5 次滅菌試驗中，每次試驗中的定量陽性對照組，檢測回收菌量均達5 × 10cfu/ 片～5 × 10cfu/ 片；定性陽性對照組，細菌生長良好。陰性對照應無菌生長。所有試驗菌片全部無細菌生長時，可判為滅菌合格。
注意事項
(1) 溫度和相對濕度對環氧乙烷氣體殺菌效果影響較大，故應嚴格控制試驗中的有關條件。
(2) 環氧乙烷液體可溶解聚乙烯、聚氯乙烯等，不可將其液體滴落于此類物品上。環氧乙烷不論液體或氣體，均可損壞賽璐璐制品，試驗時應予注意。
(3) 環氧乙烷易燃易爆，操作現場應采取防火防爆措施，不得有明火作業及電火花發生。
(4)吸入過多環氧乙烷氣體，可引起頭痛，嘔吐等中毒癥狀，嚴重者可致肺水腫等。工作環境中應有良好的通風。在每日8h 工作中，環氧乙烷濃度應不超過1.82mg/m3 （1ppm），15min 工作中暴露濃度不超過9.1mg/m3（5.0ppm）。如出現中毒癥狀，需迅速離開現場。輕者呼吸新鮮空氣，直到癥狀消除；重者應及時送醫院。
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